看点:引物二聚体是什么?引物二聚体的方法是什么?
时间:2023-06-25 14:34:03

引物二聚体是什么?

引物二聚体是引物的3'端间相互错配扩增形成的。引物二聚体的出现是必然的,只是或多或少的问题,电泳时看不到引物二聚体带也不代表没有二聚体出现,只是含量低我们 的肉眼看不到而已。提高PCR严谨(包括提高退火温度,降低引物浓度等)可大大降低二聚体的浓度。

引物二聚体的方法是什么?

1从引物自身 着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法;

2.可能模板有问题;模板浓度过小,适当加大模板量;

3.Taq酶,引物,Mg2+浓度可能过高,可 降低它们的浓度;

4.取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引 物二聚体就会消失的;理由:引物可能会发生发夹结构,自身环化等结构,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟可使引物变为单链,以减少二聚体。不过有人认为在PCR仪上95度变5min也同样达到目的,而且成功试过通过延长退火时间也可以消除引物二聚体。

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